Quantification du décalage vers la gauche des leucocytes
Les premiers types de neutrophiles morphologiquement reconnaissables sont le myéloblaste, le promyélocyte et le myélocyte. Ces cellules mûrissent en métamyélocytes, puis en bandes et enfin en neutrophiles segmentés (Fig. 7.4). Les myéloblastes, les promyélocytes et les myélocytes sont capables de se diviser, comme le prouve l’incorporation de thymidine tritiée dans leur ADN nucléaire et comme le vérifie l’observation directe en culture.22,23 Ces trois stades précoces des neutrophiles sont appelés collectivement le compartiment mitotique des neutrophiles ou le pool prolifératif des neutrophiles. Pendant l’infection, le compartiment mitotique des neutrophiles ajoute généralement une ou deux divisions cellulaires supplémentaires, augmentant ainsi la taille du pool prolifératif.23 L’ajout d’une division supplémentaire double le nombre de neutrophiles matures produits. Au cours de l’infection, le nombre de promyélocytes et de myélocytes dans la moelle osseuse augmente généralement en raison des divisions cellulaires ajoutées.24
Le left shift des neutrophiles est une expression utilisée pour indiquer une augmentation anormale des neutrophiles immatures dans la circulation25-27. Une méthode de quantification du glissement vers la gauche, en particulier en hématologie néonatale, est le rapport neutrophiles immatures/total (I/T).25-30 Un mécanisme permettant de délivrer davantage de neutrophiles aux tissus infectés est la libération prématurée de neutrophiles postmitotiques immatures (métamyélocytes et bandes) de la moelle dans la circulation. Cela entraîne une augmentation du ratio.26,31-35
Le ratio I/T des neutrophiles nécessite une numération cellulaire différentielle manuelle ; un technologue en hématologie examine au microscope 100 leucocytes sur un film sanguin coloré, en dénombrant chaque cellule selon ses caractéristiques morphologiques. Le rapport I/T est généralement calculé comme le pourcentage de neutrophiles à bande plus les métamyélocytes divisé par le pourcentage de neutrophiles segmentés plus les neutrophiles à bande plus les métamyélocytes. Une deuxième méthode courante de quantification du décalage vers la gauche est le comptage absolu des bandes, qui nécessite également un différentiel manuel. Le pourcentage de leucocytes identifiés comme des bandes est multiplié par la numération leucocytaire et la valeur est exprimée en bandes/μL de sang.36 La fiabilité du rapport I/T est affectée par les grandes différences inter-observateurs dans la classification des neutrophiles en bandes ou en formes segmentées29.
La numération cellulaire différentielle automatisée des leucocytes est une innovation relativement nouvelle en hématologie de laboratoire clinique ; un grand nombre de leucocytes sont catégorisés par des techniques de cytométrie de flux en fonction de leur taille et de leurs caractéristiques cytoplasmiques et nucléaires.4,28,37 Une petite fraction de promyélocytes, myélocytes et métamyélocytes s’échappe de la moelle et se retrouve dans le sang, et ceux-ci peuvent être mesurés par certains analyseurs d’hématologie. Dans une numération cellulaire différentielle automatisée sur certains modèles d’analyseurs hématologiques Sysmex, le décalage vers la gauche est quantifié par les granulocytes immatures (IG). Ces résultats peuvent être rapportés sous la forme du pourcentage de granulocytes immatures (IG%) ou du nombre absolu de granulocytes immatures (IG/μL). Le IG% et le IG/μL sont quelque peu analogues, mais techniquement distincts, du rapport I/T des neutrophiles et du nombre absolu de bandes. Les différentiels automatisés ont l’avantage de ne pas nécessiter de frottis sanguin ni le temps du technicien pour effectuer une analyse microscopique.4,5 De plus, une meilleure performance du différentiel automatisé par rapport aux méthodes manuelles a été rapportée sur des populations adultes sur la base d’un échantillon beaucoup plus important de leucocytes dénombrés. En outre, l’erreur humaine est supprimée lors de la discrimination entre les types de cellules, car l’affectation des types de cellules est déterminée automatiquement par des techniques de sélection prédéfinies.38 La figure 7.5 montre le canal différentiel des globules blancs (WDF) produit par les analyseurs Sysmex.6
Dans de nombreux laboratoires cliniques, les numérations différentielles automatisées ont remplacé les numérations manuelles pour les patients adultes.5,39 Un obstacle à l’adoption des différentiels leucocytaires automatisés en néonatologie était le manque d’intervalles de référence pour l’IG% et l’IG/μL dans les populations néonatales40. De plus, l’utilité de l’IG% et de l’IG/μL en tant que biomarqueurs de l’infection n’avait pas été comparée directement avec le rapport I/T des neutrophiles et le nombre absolu de bandes chez les nouveau-nés infectés par rapport aux nouveau-nés non infectés.
Des intervalles de référence (limites inférieures et supérieures des 5e et 95e percentiles) pour l’IG% et l’IG/μL ont été élaborés à l’aide des NFS de nouveau-nés ne présentant aucun signe d’infection. La figure 7.6 présente des graphiques d’intervalles de référence pour l’IG% et l’IG/μL pour la première semaine après la naissance.41
Les quatre méthodes de quantification du décalage vers la gauche avaient des performances statistiques similaires pour suggérer le diagnostic d’infection (tableau 7.1). Pour chacune des quatre méthodes, la sensibilité était faible (12 % à 15 %) tandis que la spécificité était forte (90 % à 95 %), et la valeur prédictive positive (VPP) et la valeur prédictive négative (VPN) se situaient généralement dans la fourchette basse à moyenne de 60 %. Les combinaisons des quatre avaient tendance à diminuer la sensibilité mais à augmenter la VPP.41
Le rapport I/T des neutrophiles n’est pas une méthode sensible pour identifier une infection, mais une valeur élevée est assez spécifique de l’infection. L’IG/μL et la numération des bandes ont donné des résultats similaires à ceux du rapport I/T et de l’IG%. Ces résultats nous ont amenés à conclure que, dans la plupart des cas, un différentiel automatisé devrait servir aussi bien qu’un différentiel manuel, ce qui est similaire aux conclusions tirées des NFS obtenues chez les adultes.39,42 De plus, nous avons trouvé trois comptes différentiels manuels qui présentaient ce que nous avons supposé être des erreurs de transposition (bandes placées dans la colonne seg, et vice versa). Ces cas présentaient des rapports I/T extraordinairement élevés (>0,8), mais les patients semblaient aller bien, et lorsque les NFS ont été immédiatement répétées, les rapports I/T étaient normaux (<0,2). De telles erreurs ne se produiraient pas avec des numérations différentielles automatisées.
La NFS avec différentiel leucocytaire est l’un des tests de laboratoire les plus fréquemment demandés sur les nouveau-nés et les jeunes nourrissons. Nous concluons qu’en tant que moyen de quantifier le décalage vers la gauche des leucocytes, l’IG% et l’IG/μL provenant d’une numération différentielle automatisée sur l’analyseur hématologique Sysmex sont comparables au rapport I/T et au nombre absolu de bandes basé sur une numération différentielle manuelle, bien que les valeurs IG et I/T présentent une faible corrélation. Les leucocytes différentiels automatisés utilisant d’autres types de compteurs de cellules devraient également être comparés aux comptages différentiels manuels. Nous concluons qu’une numération différentielle automatisée devrait suffire en médecine néonatale. Pour les nouveau-nés sélectionnés chez qui l’identification d’une infection est le but de la NFS, l’ajout d’une numération différentielle manuelle pourrait légèrement améliorer les performances du test.