L’isolement comportemental est un mécanisme commun et puissant d’isolement reproductif. Déterminer dans quelle mesure l’isolement comportemental varie en fonction des conditions environnementales est essentiel pour comprendre la spéciation et le maintien des frontières entre les espèces. Ici, nous avons testé l’effet de la salinité sur l’isolement comportemental (reconnaissance des espèces femelles, compétition mâle-mâle et reconnaissance des espèces mâles) entre deux poissons tueurs étroitement apparentés (Lucania goodei et L. parva) qui diffèrent dans leur tolérance à la salinité. Nous avons effectué des tests sans choix et des essais comportementaux où les mâles pouvaient entrer en compétition et courtiser les femelles en eau douce (0 ppt) et en eau saumâtre (15 ppt). Nous avons trouvé des niveaux élevés d’isolement comportemental qui ne variaient pas en fonction de la salinité. Dans les essais comportementaux, la reconnaissance des femelles par les mâles était forte et asymétrique entre les deux espèces. Les mâles de Lucania goodei préféraient les congénères et courtisaient ou s’accouplaient rarement avec les femelles de L. parva. Les mâles Lucania parva préféraient les congénères mais courtisaient et s’accouplaient facilement avec les femelles L. goodei. Cette asymétrie correspond aux asymétries précédemment documentées dans l’aptitude de la descendance hybride. Les croisements entre les mâles L. parva et les femelles L. goodei produisent des hybrides entièrement viables/fertiles, mais les croisements entre les mâles L. goodei et les femelles L. parva produisent des mâles à fertilité réduite. Par conséquent, l’isolement comportemental peut avoir évolué en partie grâce au renforcement.