Gedragsisolatie is een veelvoorkomend en krachtig mechanisme van voortplantingsisolatie. Het bepalen van de mate waarin gedragsisolatie varieert met omgevingsfactoren is van cruciaal belang voor het begrijpen van soortvorming en het handhaven van soortgrenzen. Hier hebben we het effect van zoutconcentratie getest op gedragsisolatie (vrouwelijke soortherkenning, mannetjes-mannetjes competitie, en mannelijke soortherkenning) tussen twee nauw verwante killifish (Lucania goodei en L. parva) die verschillen in zoutconcentratietolerantie. We voerden geen-keuzetests uit en gedragstests waarbij mannetjes konden concurreren en vrouwtjes het hof konden maken in zoet water (0 ppt) en brak water (15 ppt). We vonden hoge niveaus van gedragsisolatie die niet varieerden als functie van het zoutgehalte. In gedragsproeven was de herkenning van wijfjes door mannetjes sterk en asymmetrisch tussen de twee soorten. Lucania goodei mannetjes prefereerden soortgenoten en maakten zelden het hof of paarden met L. parva vrouwtjes. Lucania parva mannetjes prefereerden soortgenoten, maar maakten L. goodei vrouwtjes gemakkelijk het hof en paarden met hen. Deze asymmetrie komt overeen met eerder gedocumenteerde asymmetrieën in de fitheid van hybride nakomelingen. Kruisingen tussen L. parva mannetjes en L. goodei vrouwtjes brengen volledig levensvatbare/vruchtbare hybriden voort, maar kruisingen tussen L. goodei mannetjes en L. parva vrouwtjes brengen mannetjes voort met verminderde vruchtbaarheid. Gedragsmatige isolatie kan dus deels door versterking zijn geëvolueerd.