LETTER
In een poging om de transmissie van Staphylococcus aureus op te sporen en te controleren, worden isolaten van patiënten bewaard voor epidemiologische studies (1-3). Onderzoekers gaan er vaak van uit dat kolonies met dezelfde morfologie op de oorspronkelijke kweekplaat dezelfde kloon vertegenwoordigen. Er is echter zeer weinig literatuur om deze veronderstelling te staven. Veel studies gaan niet in op hoe isolaten uit een kweek worden geselecteerd (3-5) en stellen dat één kolonie als representatief monster wordt gekozen (6). Momenteel wordt in de trial Treating Parents to Reduce NICU Transmission of Staphylococcus aureus (TREAT PARENTS) (registratienr. NCT02223520) de concordantie beoordeeld van S. aureus-stammen die ouders en hun pasgeborenen koloniseren (7).
Als ouders of voogden toestemming hebben gegeven voor de TREAT PARENTS-studie, werden swabmonsters afgenomen van de neus, keel, lies en perianale regio om te screenen op de aanwezigheid van S. aureus. De monsters werden verzameld met het Copan Eswab transportsysteem (Copan, Murrieta, CA). Voor elk monster werd 10 μl aliquoteerd op een kwart van een S. aureus selectieve chromogene agar (SASelect; Bio-Rad, Hercules, CA) plaat en een 5% schapenbloed agar (SBA; Remel, Lenexa, KS) plaat en geïncubeerd bij 37°C gedurende 16 tot 24 uur. Tegelijkertijd werd 100 μl van elk monster aliquoteerd in tryptische soja bouillon met 6,5% natriumchloride (Bio-Rad, Hercules, CA).5% natriumchloride (Bio-Rad, Hercules, CA) en geïncubeerd bij 37°C gedurende 16 tot 24 uur. Na incubatie werd 10 μl van elke bouillon uitgeplaat op SASelect medium en 5% SBA, gestreept voor isolatie, en geïncubeerd bij 37°C gedurende 16 tot 24 uur. De kolonies moesten dezelfde kleur, grootte, consistentie en geheel hebben om identiek genoemd te worden. Twee medisch technologen lazen onafhankelijk van elkaar de platen, en er waren geen onderlinge inconsistenties bij het bepalen van identieke versus verschillende morfologieën op basis van de beschreven criteria. Voor elke morfologie van S. aureus op elke positieve plaat werden vijf afzonderlijke kolonies afzonderlijk gekweekt op 5% SBA en vervolgens ingevroren. Deze isolaten werden geanalyseerd door pulsed-field gelelektroforese (PFGE) en antimicrobiële gevoeligheidstests (AST) met standaard antistafylokokkenmiddelen.
PFGE werd uitgevoerd volgens standaardmethoden met gebruikmaking van SmaI als restrictie-enzym (8). Restrictie digestiepatronen werden geanalyseerd met de Fingerprinting 2 software (Bio-Rad). PFGE-resultaten werden geïnterpreteerd aan de hand van gemodificeerde Tenover-criteria, en isolaten werden als verwant beschouwd als hun patronen drie of minder bandverschillen vertoonden (9).
De gevoeligheid van de isolaten werd bepaald met het BD Phoenix 100-instrument (BD Diagnostics Inc, Sparks, MD) met Phoenix PMIC/ID-105-panels in overeenstemming met de instructies van de fabrikant.
Een combinatie van 14 neonaten en volwassen deelnemers had positieve S. aureus-kweken die 205 isolaten opleverden (5 isolaten van 41 waargenomen morfologieën). Van de geteste isolaten had 99,5% (204 van 205) PFGE-patronen die identiek waren aan die van de andere isolaten van een bepaalde morfologie. Eén isolaat in één groep had een verschil van één band met de andere vier isolaten, en deze worden beschouwd als epidemiologisch verwant.
AST gaf aan dat 95,1% (195 van 205) van de geteste isolaten hetzelfde profiel van gevoeligheid voor alle 16 geteste antibiotica hadden (gegevens niet getoond). Alle isolaten vertoonden categorische overeenstemming (CA; overeenstemming van susceptible/intermediate/resistant resultaten) voor alle antibiotica behalve erytromycine (90% CA). Wanneer dit kon worden bepaald, varieerde de essentiële overeenstemming (EA; MIC’s die exact overeenkomen of binnen ±1 2-voudige verdunning liggen) van 90 tot 100%. Het 95%-betrouwbaarheidsinterval voor het aandeel morfologieën met exacte overeenstemming is 0,91 tot 1 bij gebruik van een exact binomiaal betrouwbaarheidsinterval (10).
Omwille van zijn hoge kolonisatiefrequentie en zijn rol in gezondheidszorg-geassocieerde infecties (1, 6, 8, 11), zal S. aureus een vaak gearchiveerde pathogeen blijven voor epidemiologische studies. Een gebrek aan literatuur die de selectie van S. aureus-kolonies specificeert, lijkt te suggereren dat een fundamentele veronderstelling in deze studies is dat een enkele kolonie van hetzelfde morfotype representatief is voor dezelfde stam. De resultaten van onze studie tonen aan dat deze veronderstelling opgaat voor morfologisch vergelijkbare kolonies uit één cultuur. Een interessant, maar niet geheel onverwacht, resultaat was een verschillend gevoeligheidsprofiel voor 5% van de isolaten die identieke bandingpatronen hadden.