Trial design, compliance and ethics approval
Deze studie werd ontworpen volgens de richtlijnen van evidence-based medicine en gerapporteerd met gebruikmaking van de Consolidated Standards of Reporting Trials (CONSORT) -. De studieopzet is een prospectieve, enkelblinde, twee-armige parallelle klinische veldproef ter bepaling van de dosering. De studie voldeed aan de richtlijn van de Europese Economische Gemeenschap betreffende het aantonen van de werkzaamheid van geneesmiddelen voor diergeneeskundig gebruik die antimicrobiële stoffen bevatten. Zowel de Ethische Commissie voor Dierproeven van de Universiteit van Helsinki in Finland als de Nationale Raad voor Dierproeven in Finland keurden het studieprotocol goed. De eigenaars gaven hun schriftelijke geïnformeerde toestemming waarin ze instemden met deelname met hun hond.
Studiepopulatie, in- en exclusiecriteria
Deze studie werd uitgevoerd in het Small Animal Teaching Hospital, Faculteit Diergeneeskunde, Universiteit van Helsinki, Finland. De studiepopulatie werd gerekruteerd uit het patiëntenmateriaal van een placebogecontroleerde, gerandomiseerde, dubbelblinde, prospectieve klinische studie naar de effectiviteit van orale tylosine bij de behandeling van recidiverende diarree bij honden, die werd uitgevoerd vlak voor deze huidige doseringsbepalingstrial . Honden kwamen in aanmerking voor het onderzoek ter bepaling van de dosering van oraal tylosine als ze reageerden op een behandeling met tylosine in een dosering van 25 mg/kg eenmaal daags gedurende zeven dagen in het eerder genoemde onderzoek. De inclusiecriteria waren dat de honden ten minste zes maanden oud waren en leden aan recurrente diarree die reageerde op een behandeling met tylosine. Ze mochten geen systemische corticosteroïden, niet-steroïdale ontstekingsremmers of andere antibiotica dan tylosine hebben gekregen in de 90 dagen voorafgaand aan de proef ter bepaling van de tylosinedosering. Zogende teven werden uitgesloten, evenals honden met bewijs van systemische of orgaan-gerelateerde ziekte die secundair diarree zou kunnen veroorzaken.
De honden ondergingen een eerste onderzoek voorafgaand aan de inschrijving in de tylosine effectiviteit proef om ervoor te zorgen dat ze voldeden aan de selectiecriteria. In het kort, het eerste onderzoek omvatte de klinische voorgeschiedenis en lichamelijk onderzoek van de honden, bloedmonsters voor een compleet bloedbeeld en serum biochemisch profiel, urineonderzoek, fecale analyse voor endoparasieten en enteropathogene bacteriën, en gastroduodenoscopie met mucosale biopten van het duodenum. Het protocol en de resultaten van het eerste onderzoek zijn eerder gepubliceerd .
Uitkomstmaten
Het primaire doel van de huidige proef was om te beoordelen of dagelijkse doses van 5 mg/kg of 15 mg/kg tylosine met een eenmaal daags doseringsinterval gedurende zeven dagen een vergelijkbaar effect zouden hebben op de fecale consistentie bij diarree-terugvallen als dat van een initiële dosis van 25 mg/kg tylosine eenmaal daags gedurende zeven dagen bij deze honden, een dosering die effectief is gebleken bij het onder controle houden van canine TRD . Verder om te beoordelen of de tylosine dosis 5 mg/kg even effectief was als de 15 mg/kg dosis. Om dit te evalueren, diende de eliminatie van diarree als belangrijkste criterium. Aan de eliminatie van diarree werd voldaan wanneer werd vastgesteld dat op drie opeenvolgende dagen de ontlastingscore voor elk van de uitwerpselen van de hond drie of minder was en bleef. Een gemiddelde score voor de consistentie van de ontlasting, toegekend tijdens de laatste drie dagen van de zevendaagse behandelingsperiode, diende als primaire uitkomstmaat. Om de gemiddelde score voor de consistentie van de ontlasting te bepalen, beoordeelden en noteerden de eigenaren gedurende het onderzoek de consistentie van de ontlasting van elk van hun honden volgens een gestandaardiseerd scoresysteem voor ontlasting dat eerder door Moxham was opgesteld. Een dergelijk scoresysteem voor de ontlasting is nuttig gebleken bij het evalueren van het succes van de behandeling bij diarreepatiënten. In het kort is het scoresysteem voor ontlasting gebaseerd op een negenpuntsschaal, bestaande uit scores van één tot vijf, met intervallen van halve punten. Om uniformiteit in de score van de fecale consistentie te verzekeren, omvat het zowel een verbale beschrijving als een visueel beeld voor elk van de scores van de fecale consistentie. Scores 1 en 1,5 stonden voor harde en droge ontlasting. Scores 2 en 2,5 duidden op goed gevormde uitwerpselen die bij het oprapen geen sporen nalieten. Score 3 stond voor ontlasting met een licht vochtige consistentie, terwijl score 3,5 stond voor ontlasting met een vochtige consistentie, maar die nog wel een zekere vorm had. Scores 4 tot en met 5 beschreven ontlasting van slechte consistentie.
Om te evalueren of de tylosine dosering effectief was, berekende de onderzoeker een gemiddelde fecale consistentie score van de scores toegewezen voor elk van de honden ontlasting gedurende de laatste drie dagen van de zeven-daagse behandelingsperiode op basis van de gegevens van de eigenaar. Een responder werd gedefinieerd als een hond met een gemiddelde ontlastingsconsistentiescore van drie of minder; een non-responder had een score van meer dan drie. De eigenaren waren niet op de hoogte van deze definities.
Secundaire uitkomstmaten werden gedefinieerd om de frequentie van terugkeer en de tijd tot terugkeer van diarree te evalueren bij een 25 mg/kg dosering van tylosine. Het opnieuw optreden van diarree werd gedefinieerd als wanneer de ontlasting van de hond gedurende ten minste twee opeenvolgende defecaties een consistentiescore van ten minste vier op de schaal had. Verdere secundaire uitkomstmaten werden gedefinieerd om de invloed van de drie verschillende tylosinedoseringen (5, 15 en 25 mg/kg) op het tijdstip van ophouden van de diarree te beoordelen. De dag waarop de diarree ophield werd gedefinieerd als de dag van de behandelingsperiode waarop de ontlastingsscore voor elke ontlasting van de hond drie of minder was en bleef.
Interventies
Bij de beoordeling of de honden in aanmerking kwamen voor deze doseringsbepalingstest hadden alle honden diarree en begonnen hun tylosinebehandeling met een dosis van 25 mg/kg eenmaal daags gedurende zeven dagen. De hondeneigenaren beoordeelden en registreerden de consistentie van de ontlasting van elk van hun honden. Op dag zeven van de behandelingsperiode onderging elke hond een lichamelijk onderzoek en werden de gegevens over de consistentie van de ontlasting verzameld. De onderzoeker noteerde de dag waarop de diarree van de hond ophield en berekende een gemiddelde fecale consistentie score voor elke hond over de laatste drie dagen van de behandelingsperiode bij een tylosine dosering van 25 mg / kg; de honden die werden gedefinieerd als responders werden geacht in aanmerking te komen voor deelname aan de doseringsbepaling proef. De behandeling met 25 mg/kg tylosine werd vervolgens stopgezet voor de deelnemende honden en een follow-up periode van maximaal twee maanden diende om te bepalen of de diarree terugkeerde. Er werden geen extra veranderingen toegestaan in de voeding of medicatie van de hond. Bij het voldoen aan de criteria voor het opnieuw optreden van diarree (ontlastingsscore ≥ 4 bij ten minste twee opeenvolgende ontlastingen) onderging elke hond een lichamelijk onderzoek, waarbij de onderzoeker ook de consistentie van de ontlasting door rectale palpatie beoordeelde en bevestigde. De honden kregen vervolgens tylosine (Tylosine tartraat 120 mg en 240 mg tabletten, Universiteits Apotheek, Helsinki, Finland; gelijk aan 100 mg en 200 mg tylosine) eenmaal daags gedurende zeven dagen in doses van ofwel 5 mg/kg of 15 mg/kg.
Tijdens de zeven-daagse behandelingsperiode bleven de eigenaren de ontlasting van elk van hun honden beoordelen en registreerden de ontlastingsconsistentie volgens de richtlijnen. Op dag drie belde de onderzoeker de eigenaar om te verzekeren of de klinische toestand van de hond voldeed aan de criteria van het humane eindpunt van de studie en of de hond moest worden vrijgegeven uit de studie en dienovereenkomstig moest worden behandeld. Een humaan eindpunt werd gedefinieerd als het punt waarop de klinische toestand van de hond slecht was en hij leed aan overmatige diarree. Op dag zeven onderging de hond een tweede lichamelijk onderzoek, inclusief rectale palpatie en een evaluatie van de ontlastingsconsistentie van de hond. De gegevens over de consistentie van de ontlasting werden verzameld, en een gemiddelde score voor de consistentie van de ontlasting werd berekend voor elke hond op basis van de laatste drie dagen van de behandelingsperiode bij de doseringen van 5 mg/kg of 15 mg/kg.
Toewijzing aan behandelingsgroepen
Na het begin van de diarree binnen de follow-up periode van twee maanden kregen de honden een oplopend onderzoeksnummer dat de volgorde aangaf waarin de diarree willekeurig terugkwam. De onderzoeker wees vervolgens de honden in een 1:1 verhouding toe aan twee verschillende doseringsgroepen – 5 mg/kg of 15 mg/kg – die tylosine eenmaal daags oraal kregen gedurende zeven dagen. Alle honden met oneven studienummers werden toegewezen aan de 5 mg/kg doseringsgroep, en die met even studienummers aan de 15 mg/kg doseringsgroep.
Blinder
De studie was enkelblind en dus open voor de onderzoeker, maar geblindeerd voor de hondeneigenaar. De blinderingsprocedure werd uitgevoerd door de 120 mg tylosine tartraat tablet flessen te etiketteren als “Tylosine tart. S” en de flesjes met 240 mg tylosine tartraat tabletten als “Tylosine tart. V”. De tabletten waren visueel identiek.
Statistische methoden
Descriptieve statistieken werden gebruikt om de gegevens samen te vatten. De Shapiro-Wilk test diende om te bepalen of de gegevens normaal verdeeld waren; niet-parametrische gegevens werden uitgedrukt als mediaan en bereik. De Wilcoxon signed rank test werd gebruikt voor niet-parametrische gegevens om de gemiddelde fecale consistentie scores van de laatste drie dagen van de behandelingsperiode bij de 25 mg/kg tylosine dosering te vergelijken met de scores bij de 15 mg/kg en 5 mg/kg tylosine doseringen. De Mann-Whitney U-test werd gebruikt om de verschillen te onderzoeken tussen de gemiddelde scores voor de consistentie van de ontlasting in de 5 mg/kg en 15 mg/kg tylosine doseringsgroepen. Om het effect van elke dosering op de tijd tot het ophouden van de diarree te evalueren, werden de Wilcoxon signed rank test en de Mann-Whitney U test gebruikt. Het niveau van statistische significantie werd vastgesteld op P < 0,05; alle statistische analyses werden uitgevoerd met een commercieel beschikbaar statistisch softwaresysteem (SPSS 18.0 voor Windows).