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Num esforço para rastrear e controlar a transmissão de Staphylococcus aureus, os isolados de doentes são guardados para estudos epidemiológicos (1-3). Os investigadores dos estudos assumem frequentemente que colónias com a mesma morfologia na placa de cultura original representam o mesmo clone. No entanto, existe uma literatura muito limitada para apoiar esta suposição. Muitos estudos não abordam a forma como os isolados são seleccionados de uma cultura (3-5) e declaram que uma colónia é escolhida como amostra representativa (6). Actualmente, o ensaio Treating Parents to Reduce NICU Transmission of Staphylococcus aureus (TREAT PARENTS) (registo nº NCT02223520) está a avaliar a concordância das estirpes de S. aureus que colonizam os pais e os seus neonatos (7). Para testar a suposição acima referida, várias colónias de S. aureus foram salvas de uma única placa de cultura e testadas para determinar os seus genótipos e perfis de susceptibilidade.
p>Após os pais ou tutores consentiram no ensaio TREAT PARENTS, foram colhidas amostras de esfregaço das nuaras, garganta, virilha, e região perianal para rastrear a presença de S. aureus. As amostras foram recolhidas com o sistema de transporte Copan Eswab (Copan, Murrieta, CA). Para cada amostra, 10 μl foi aliquotada a um quarto de uma placa de S. aureus (SASelect; Bio-Rad, Hercules, CA) e uma placa de ágar sangue de ovelha (SBA; Remel, Lenexa, KS) a 5% e incubada a 37°C durante 16 a 24 h. Ao mesmo tempo, 100 μl de cada amostra foi aliquotada a um caldo de soja triptico contendo 6.5% de cloreto de sódio (Bio-Rad, Hercules, CA) e incubado a 37°C durante 16 a 24 h. Após a incubação, 10 μl de cada caldo foi laminado em meio SASelect e 5% SBA, estriado para isolamento, e incubado a 37°C durante 16 a 24 h. As colónias tiveram de ter a mesma cor, tamanho, consistência, e totalidade para serem chamadas idênticas. Dois tecnólogos médicos leram independentemente as placas, e não houve inconsistências entre elas na determinação de morfologias idênticas versus morfologias diferentes, com base nos critérios descritos. Para cada morfologia de S. aureus em cada placa positiva, cinco colónias separadas foram subculturadas individualmente em SBA a 5% e depois congeladas. Estes isolados foram analisados por electroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e teste de susceptibilidade antimicrobiana (AST) com agentes antiestilfocócicos padrão.
PFGE foi realizado de acordo com métodos padrão usando SmaI como enzima de restrição (8). Os padrões de digestão de restrição foram analisados com o software Fingerprinting 2 (Bio-Rad). Os resultados de PFGE foram interpretados utilizando critérios Tenover modificados, e os isolados foram considerados relacionados se os seus padrões tivessem três ou menos diferenças de banda (9).
Susceptibilidade isolada foi determinada com o instrumento BD Phoenix 100 (BD Diagnostics Inc., BD Diagnostics Inc., BD Diagnostics Inc.), Sparks, MD) com painéis Phoenix PMIC/ID-105, de acordo com as instruções do fabricante.
Uma combinação de 14 neonatos e participantes adultos tinha culturas positivas de S. aureus que produziam 205 isolados (5 isolados de 41 morfologias observadas). Dos isolados testados, 99,5% (204 de 205) tinham padrões PFGE que eram idênticos aos dos outros isolados de uma morfologia particular. Um isolado de um grupo tinha uma diferença de uma banda dos outros quatro isolados, e estes são considerados epidemiologicamente relacionados.
AST indicou que 95,1% (195 de 205) dos isolados testados tinham o mesmo perfil de susceptibilidade aos 16 antibióticos testados (dados não mostrados). Todos os isolados mostraram concordância categórica (CA; concordância de resultados susceptíveis/intermediários/resistentes) para todos os antibióticos excepto a eritromicina (90% CA). Quando foi possível determinar, a concordância essencial (EA; MICs que correspondem exactamente ou estão dentro de ±1 diluição de 2 vezes) variou de 90 a 100%. O intervalo de confiança de 95% para a proporção de morfologias com concordância exacta é de 0,91 a 1 quando se utiliza um intervalo de confiança binomial exacto (10).
Por causa da sua elevada frequência de colonização e do seu papel nas infecções associadas aos cuidados de saúde (1, 6, 8, 11), S. aureus continuará a ser um agente patogénico comummente arquivado para estudos epidemiológicos. A falta de literatura que especifique a selecção de colónias de S. aureus parece sugerir que um pressuposto fundamental nestes estudos é que uma única colónia do mesmo morfótipo é representativa da mesma estirpe. Os resultados do nosso estudo mostram que esta suposição é apropriada para colónias morfologicamente semelhantes de uma única cultura. Um resultado interessante, mas não totalmente inesperado, foi a diferença de perfis de susceptibilidade para 5% dos isolados que apresentavam padrões de feixe idênticos.