Actividades farmacológicas in-vivo de Calendula officinalis
p>Atividades antidiabéticas e anti hiperlipidémicas: A diabetes induzia o rato por injecção intraperitoneal única de aloxan (150mg/kg) de peso corporal. O nível de glicose no sangue e o nível de açúcar na urina eram significativamente elevados em ratos diabéticos em comparação com ratos normais. Com a administração oral de extracto hidroalcoólico de Calendula officinalis a ratos diabéticos na dose de 25 e 50mg/kg de peso corporal, o nível de glicose no sangue e de açúcar na urina diminuiu significativamente em comparação com o grupo de ratos diabéticos. O extracto hidroalcoólico de Calendula officinalis em ratos diabéticos na dose de 100mg/kg de peso corporal considerado altamente significativo, pois restabeleceu todos os parâmetros para os níveis normais de glicose no sangue, açúcar na urina e soro lipídico em ratos diabéticos aloxanos. O extracto aumenta o nível total de hemoglobina. O extracto era semelhante ao da insulina. Assim, a investigação mostra claramente que o extracto hidroalcoólico de Calendula officinalis tem efeitos antidiabéticos e anti-hiperlipidémicos.49 As estruturas dos officinósidos foram elucidadas com base em provas químicas e físico-químicas. As actividades inibitórias das principais saponinas das flores de C. officinalis sobre o aumento dos níveis de glucose sérica em ratos carregados de glucose oral, sobre o esvaziamento gástrico em ratos carregados de carboxi metilcelulose sódica, e sobre lesões da mucosa gástrica induzidas por etanol ou indometacina em ratos e também discutiram os requisitos estruturais para estas actividades.50
Actividades cardiovasculares: Calendula officinalis podia ser cardio-protectora contra doenças cardíacas isquémicas. Foram utilizados dois grupos de corações: os corações de ratos tratados foram perfundidos com solução de Calendula officinalis a 50mM em tampão KHB (em mM) cloreto de sódio 118mM, cloreto de potássio 4.7mM, cloreto de cálcio 1.7mM, bicarbonato de sódio 25mM, bifosfato de potássio 0.36mM, sulfato de magnésio 1.2mM, e glucose 10mM) durante 15min antes de submeter o coração a isquemia, enquanto o grupo de controlo foi perfused apenas com o tampão. A calêndula alcançou protecção cardiovascular estimulando a pressão desenvolvida no ventrículo esquerdo e o fluxo aórtico, bem como reduzindo o tamanho do enfarte do miocárdio e a apoptose dos cardiomiócitos. A protecção cardiovascular parece ser alcançada através da alteração do sinal de morte mediada por reperfusão de isquemia para um sinal de sobrevivência através da modulação das vias antioxidantes e anti-inflamatórias, como evidenciado pela activação de Akt e Bcl2 e depressão de TNFα. Os resultados reforçam ainda mais o conceito de utilização de produtos naturais em doenças degenerativas como a doença isquémica do coração.51
Atividades hepatoprotectoras: O extracto 80% metanolico de folhas de Calendula officinalis foi investigado contra danos hepáticos provocados por acetaminofen em 30 ratos albinos machos. O acetaminofeno produz 100% de mortalidade na dose de 1gm/kg em ratos, enquanto o pré-tratamento de ratos com Calendula officinalis (1,0gm/kg) reduziu a morte para 30%. O pré-tratamento de ratos com extracto de folhas (500mg/kg por via oral, quatro doses a intervalos de 12 horas) evitou (p<0,05) o acetaminofeno (640mg/kg induz o aumento de transaminases séricas (GOT, GPT), bilirrubina sérica e fosfatase alcalina sérica. O pós-tratamento com três doses sucessivas de extracto de folhas (500mg/kg. 6 horas por hora) limitou os danos hepáticos induzidos pela acetaminofena (p<0,05).52
efeitos antioxidantes: Um extracto de Calendula officinalis Linn., foi avaliado pelo seu potencial antioxidante por administração oral de extracto alcoólico de Calendula inibe a geração de superóxido em macrófagos em ratos albinos suíços femininos em 12,6% e 38,7% em doses de 100 e 250 mg=kg de peso corporal. A administração oral de Calendula officinalis a ratos durante 1 mês aumentou significativamente a actividade catalítica. O extracto produziu um aumento significativo dos níveis de glutatião no sangue e no fígado. Verificou-se que o glutatião redutase aumentou, enquanto que o glutatião peroxidase diminuiu após a administração de extracto de Calendula.53
Atividades anti-helmínticas: As flores secas e folhas de C. officinalis têm actividade anti-helmíntica. O extracto aquoso de flores secas e folhas de C. officinalis foram preparados pelo método de decocção. O ensaio foi realizado em vermes de terra adultos indianos, devido à sua semelhança anatómica e fisiológica com o parasita de vermes intestinais redondos do ser humano. As flores de Calendula officinalis e extractos de folhas também demonstraram ter actividade anti-helmíntica os extractos brutos de flores de C. officinalis e extractos de folhas demonstraram paralisia a 56,5min e morte de vermes a 111,2minutos. As plantas contêm saponinas e também mostraram potencial anti-helmíntico que estão de acordo com relatórios anteriores que revelam que as saponinas são conhecidas por terem actividade anti-helmíntica.54
Atividades anti-inflamatórias: O extracto etílico de Calendula officinalis possuía uma actividade anti-inflamatória significativa contra a carragenina e edema de pata induzido por dextrano. A administração oral dos 250 e 500mg/kg de peso corporal do extracto de Calendula officinalis produziu inibição significativa (50,6 e 65,9% respectivamente) no edema das patas de animais induzido por carragenina e 42,9 e 42,4% respectivamente com inflamação produzida por dextrano. No modelo anti-inflamatório crónico utilizando formalina, a administração de 250 e 500mg/kg de extracto de calêndula de peso corporal produziu uma inibição de 32,9 e 62,3%, respectivamente, em comparação com os controlos. A produção de TNF-α por cultura de macrófagos tratados com lipopolissacarídeo (LPS) foi significativamente inibida pelo extracto. Além disso, níveis aumentados de citocinas pró-inflamatórias IL-1β, IL-6, TNF-α e IFN-γ e proteína de fase aguda, proteína C reactiva (CRP) em ratos produzidos por injecção de LPS foram inibidos significativamente pelo extracto. Verificou-se também que o nível de ciclooxigenase-2 (Cox-2) induzido pelo LPS no baço de ratos foi inibido pelo tratamento do extracto. Os resultados mostraram que a potente resposta anti-inflamatória do extracto de C. officinalis pode ser mediada pela inibição de citocinas pró-inflamatórias e da síntese de Cox-2 e subsequente prostaglandina.24 A aplicação tópica de um extracto 70% de etanol das flores em ratos numa dose de 1,2mg/ano (correspondente a 4,16mg de droga bruta) reduziu o edema da orelha induzido por óleo de croton em 20%. Aplicação externa de um extracto de dióxido de carbono das flores (300mg/cm2) suprimido de edema de orelha induzido por óleo de croton em ratos.55
Atividades cicatrizantes e angiogénicas: A actividade angiogénica de Calendula officinalis L. (Asteraceae) extracto etanolico e diclorometano e fracções hexânicas foram avaliadas utilizando os Modelos 36 ratos e 90 ovos embrionados para avaliar as actividades cicatrizantes e angiogénicas de extractos e fracções da planta, através da indução de feridas cutâneas e da membrana corioalantóica, respectivamente. O efeito da proliferação vascular foi também testado a partir do estudo para verificar a intensidade da expressão do factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) em feridas cutâneas em ratos. Na avaliação morfométrica foi observado um aumento da área vascular e da percentagem de áreas marcadas a vermelho em CAM tratadas como controlo positivo 1% (17 ß-estradiol), extracto etanolico 1%, fracção de diclorometano 1% e fracção hexânica 1%, em comparação com o controlo de solvente (etanol 70%). A planimetria digital por contagem de pontos realizada em ratinhos com extracto etanolico 1% revelou um aumento no número de vasos sanguíneos em comparação com o controlo com solvente.56 Reportaram uma diferença estatisticamente significativa na redução da área total da ferida em comparação com o controlo (p<0,05), mostrando uma diminuição global de 41,71% no grupo experimental em comparação com 14,52% no grupo de controlo. Concluem que a aplicação do extracto de Calêndula aumenta significativamente a epitelização em ulcerações venosas crónicas. A terapia com calêndula oferece um tratamento não invasivo e suave para verruga plantar difícil de tratar, lesões hiperqueratóticas dolorosas, e bursa inflamada secundária a hallux abducto valgus.57
Atividades anticancerígenas: Os resultados obtidos indicaram que nenhum dos extractos teve um efeito mitogénico directo nos linfócitos ou timócitos humanos (índice de estimulação, SI<0.07). Entre as plantas estudadas, C. officinalis mostrou um efeito inibitório completo na proliferação de linfócitos na presença de PHA (intervalo SI 0.01-0.49).58
Atividades farmacológicas in vitro de calendula officinalis
Atividades hepatoprotectoras: Os efeitos hepatoprotectores potenciais dos extractos de Calendula officinalis e morus Alba contra a citotoxicidade e o stress oxidativo induzido pelo tetracloreto de carbono (CCl4) em hepatócitos primários isolados de ratos. O efeito dose-resposta de diferentes concentrações de extractos de Calendula officinalis e Morus Alba (1, 10, 100 e 1000µg/ml) sobre o CCl4 induziu uma diminuição da viabilidade% de hepatócitos isolados de ratos. Os hepatócitos foram isolados por perfusão de colagenase técnica em duas etapas. A citotoxicidade foi determinada através da avaliação da viabilidade celular e fuga de enzimas citosólicas, tais como alanina-aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e lactato desidrogenase (LDH). O stress oxidativo foi avaliado através da determinação do nível reduzido de glutatião (GSH) e da peroxidação lipídica, conforme indicado pela produção de substâncias reactivas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A exposição de hepatócitos isolados de rato ao CCl4 causou citotoxicidade e lesão oxidativa, manifestada pela perda de viabilidade celular e aumento significativo de fugas de ALT, AST e LDH. Além disso, o CCl4 causou o esgotamento progressivo do conteúdo intracelular de GSH e um aumento significativo da acumulação de TBARS. A pré-incubação de hepatócitos com extractos de Calendula officinalis ou morus alba melhorou a hepatotoxicidade e o stress oxidativo induzido pelo CCl4, como indicado pela melhoria significativa na viabilidade celular e fugas de enzimas (ALT, AST e LDH). Além disso, uma melhoria significativa do teor de GSH e uma diminuição significativa da formação de TBARS em comparação com as células tratadas com CCl4. O efeito dose-resposta de diferentes concentrações de extractos de Calendula officinalis e morus alba (1, 10, 100 e 1000µg/ml) no CCl4 induziu uma diminuição na viabilidade% de hepatócitos isolados de ratos. Os resultados revelaram que o CCl4 (5mM) induziu uma diminuição significativa na % de viabilidade dos hepatócitos isolados de ratos após 30 min de período de incubação. Esta diminuição na viabilidade foi dependente do tempo em comparação com um grupo de controlo.59
Atividades antibacterianas: Os extractos etanólicos e aquosos de Calendula officinalis inibem o crescimento das bactérias utilizadas no estudo, em concentrações que variam entre 125µg/ml a 64mg/ml. O extracto metanólico inibiu o crescimento de S. aureus e E. coli a 64mg/ml. O extracto aquoso de Calendula officinalis exibiu a maior actividade antibacteriana contra todas as bactérias testadas. S. aureus foi considerado mais susceptível em comparação com outras bactérias.60 As actividades antibacterianas de Calendula officinalis Linn. O pó foliar seco de Calendula officinalis foi sucessivamente extraído com éter de petróleo, clorofórmio e etanol utilizando Soxhlet e macerado para formar o extracto de água. Todos os extractos foram submetidos a uma triagem para a sua actividade antibacteriana e antifúngica utilizando o método de difusão de poço de ágar. Os microrganismos utilizados para antibacterianos e antifúngicos foram Bacillus subtulis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Candida albicans e Aspergillus niger. A gentamicina 5µg/ml foi utilizada como padrão. Os extractos mostraram actividade antimicrobiana foram submetidos a um ensaio de concentração inibitória mínima pelo método das diluições de duas dobras. O éter de petróleo, clorofórmio, etanol e extracto de água mostraram actividade antibacteriana in-vitro.61 Foi estudada a actividade antimicrobiana do extracto de C. officinalis etanolico, metanolico, acetona e clorofórmio contra as estirpes gram-positivas besteriais foram Escherichia coli, Staphylococcus anrens, e as estirpes gram-negativas foram Salmonella typhae e Vibrio cholera.A estirpe fúngica utilizada foi Candida albicans. O extracto etanólico deu actividade contra E. coli, Vibrio cholera e Candida albicans. O extracto metanólico deu apenas contra a Candida albicans. O clorofórmio deu actividade antimicrobiana contra todos os micróbios enquanto a acetona deu apenas contra a E. coli.62
Actividade anticancerígena: Os extractos flavonóides (0,05-50µg/ml) não causaram efeito significativo na proliferação de duas linhas celulares. Pode estar relacionado com a molécula de açúcar ligada na posição 3 dos flavonóides que podem reduzir a sua capacidade de ligar aromatase e outras enzimas.63 Treze saponinas foram isoladas e identificadas de Calendula officinalis, C. arvensis e Hedera helix. As actividades mutagénicas e antimutagénicas destes produtos foram investigadas utilizando uma técnica de incubação líquida modificada do ensaio de Salmonella/microssomal. Foi utilizada a estirpe TA98±S9 da mistura de Salmonella testter. O rastreio da actividade antimutagénica foi realizado com um promutagénio conhecido: benzo-pireno e concentrado de urina mutagénica de um fumador. As actividades antimutagénicas foram também comparadas com a actividade da clorofilina. Todas as saponinas foram consideradas como não tóxicas e não mutagénicas para doses de 400/µg.64
Atividades anti-inflamatórias: O extracto hidroalcoólico de Calendula officinalis pode suprimir as actividades da 5-lipoxigenase (5-LO) e da ciclooxigenase-2 (COX-2) (enzimas chave) na formação de eicosanóides pró-inflamatórios do ácido araquidónico.65 A ocorrência de dermatite aguda de grau 2 ou superior foi significativamente menor (41% v 63%; P<.001) com o uso de calêndula do que com trolamina. Além disso, os pacientes que recebiam calêndula tinham uma interrupção menos frequente da radioterapia e reduziam significativamente a dor induzida pela radiação. A calêndula é altamente eficaz na prevenção de dermatites agudas de grau 2 ou superior e deve ser proposta para pacientes submetidos a irradiação pós-operatória para cancro da mama.66
Atividades antioxidantes: O extracto aquoso de pétalas mostrou uma maior actividade antioxidante do que as folhas. Os resultados obtidos no presente estudo indicam que as folhas e pétalas de Calendula officinalis são uma fonte potencial de antioxidantes naturais.67 Um extracto alcoólico de Calendula officinalis Linn (Composite) foi avaliado in vitro pelo seu potencial antioxidante. O extracto de Calendula officinalis foi descoberto para procurar radicais superóxidos gerados pela foto redução de riboflavina e radicais hidroxil gerados pela reacção de Fenton e inibidos pela peroxidação lipídica in vitro. As concentrações necessárias para inibição de 50% (IC50) foram de 500, 480, e 2000 mg=mL, respectivamente. O extracto de radicais ABTS e radicais DPPH e IC50 foram 6,5 e 100 mg=mL, respectivamente.68 Para o extracto de Calendula officinalis de 7,5mg/ml de concentração, o LPO diminuiu lentamente com a dose de 68% para 40% a 20kGy. A LPO para 3,75mg/ml de concentração diminuiu subitamente de 56% para 28% a 1kGy dose. Depois, diminuiu lentamente com a dose.69
actividades Anti-HIV: O extracto de clorofórmio das flores inibiu a replicação do HIV-1 em células linfocitárias MOLT-4 infectadas agudamente in vitro (IC50 0,4mg/ml). Um extracto de clorofórmio também inibiu a actividade da transcriptase inversa do HIV-1 de forma dose-dependente (ED50 51,0mg/ml).70