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En un esfuerzo por rastrear y controlar la transmisión de Staphylococcus aureus, se guardan aislamientos de pacientes para estudios epidemiológicos (1-3). Los investigadores del estudio suelen asumir que las colonias con la misma morfología en la placa de cultivo original representan el mismo clon. Sin embargo, la literatura que apoya esta suposición es muy limitada. Muchos estudios no abordan cómo se seleccionan los aislados de un cultivo (3-5) y afirman que se elige una colonia como muestra representativa (6). Actualmente, el ensayo Treating Parents to Reduce NICU Transmission of Staphylococcus aureus (TREAT PARENTS) (número de registro NCT02223520) está evaluando la concordancia de las cepas de S. aureus que colonizan a los padres y a sus neonatos (7). Para comprobar la hipótesis mencionada, se guardaron múltiples colonias de S. aureus de una sola placa de cultivo y se analizaron para determinar sus genotipos y perfiles de susceptibilidad.
Una vez que los padres o tutores dieron su consentimiento para participar en el ensayo TREAT PARENTS, se recogieron muestras de hisopos de las fosas nasales, la garganta, la ingle y la región perianal para detectar la presencia de S. aureus. Las muestras se recogieron con el sistema de transporte Copan Eswab (Copan, Murrieta, CA). Para cada muestra, se alicuotaron 10 μl en una cuarta parte de una placa de agar cromogénico selectivo para S. aureus (SASelect; Bio-Rad, Hércules, CA) y una placa de agar sangre de oveja al 5% (SBA; Remel, Lenexa, KS) y se incubaron a 37 °C durante 16 a 24 h. Al mismo tiempo, se alicuotaron 100 μl de cada muestra en caldo de soja tríptico que contenía 6.5% de cloruro sódico (Bio-Rad, Hercules, CA) y se incubó a 37°C durante 16 a 24 h. Tras la incubación, se sembraron 10 μl de cada caldo en medio SASelect y 5% de SBA, se hicieron estrías para el aislamiento y se incubaron a 37°C durante 16 a 24 h. Las colonias debían tener el mismo color, tamaño, consistencia y totalidad para ser consideradas idénticas. Dos tecnólogos médicos leyeron las placas de forma independiente y no hubo incoherencias entre ellos a la hora de determinar las morfologías idénticas frente a las diferentes sobre la base de los criterios descritos. Para cada morfología de S. aureus en cada placa positiva, se subcultivaron individualmente cinco colonias separadas en SBA al 5% y luego se congelaron. Estos aislados se analizaron mediante electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) y pruebas de susceptibilidad antimicrobiana (AST) con agentes antiestafilocócicos estándar.
La PFGE se realizó de acuerdo con los métodos estándar utilizando SmaI como enzima de restricción (8). Los patrones de digestión de restricción se analizaron con el software Fingerprinting 2 (Bio-Rad). Los resultados de PFGE se interpretaron utilizando los criterios modificados de Tenover, y los aislados se consideraron relacionados si sus patrones tenían tres o menos diferencias de banda (9).
La susceptibilidad de los aislados se determinó con el instrumento BD Phoenix 100 (BD Diagnostics Inc, Sparks, MD) con los paneles Phoenix PMIC/ID-105 de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Una combinación de 14 neonatos y adultos participantes tuvieron cultivos positivos de S. aureus que dieron lugar a 205 aislados (5 aislados de 41 morfologías observadas). De los aislados analizados, el 99,5% (204 de 205) tenían patrones de PFGE que eran idénticos a los de los otros aislados de una morfología concreta. Un aislado de un grupo presentaba una diferencia de una banda con respecto a los otros cuatro aislados, y éstos se consideran epidemiológicamente relacionados.
La prueba de detección de enfermedades indicó que el 95,1% (195 de 205) de los aislados analizados tenían el mismo perfil de susceptibilidad a los 16 antibióticos analizados (datos no mostrados). Todos los aislados mostraron una concordancia categórica (CA; concordancia de los resultados susceptibles/intermedios/resistentes) para todos los antibióticos excepto la eritromicina (90% CA). Cuando pudo determinarse, la concordancia esencial (EA; MICs que coinciden exactamente o están dentro de una dilución de ±1 2 veces) osciló entre el 90 y el 100%. El intervalo de confianza del 95% para la proporción de morfologías con acuerdo exacto es de 0,91 a 1 cuando se utiliza un intervalo de confianza binomial exacto (10).
Debido a su alta frecuencia de colonización y a su papel en las infecciones asociadas a la atención sanitaria (1, 6, 8, 11), S. aureus seguirá siendo un patógeno comúnmente archivado para los estudios epidemiológicos. La falta de literatura que especifique la selección de colonias de S. aureus parece sugerir que una suposición fundamental en estos estudios es que una sola colonia del mismo morfotipo es representativa de la misma cepa. Los resultados de nuestro estudio demuestran que esta suposición es adecuada para las colonias morfológicamente similares de un mismo cultivo. Un resultado interesante, pero no del todo inesperado, fue que los perfiles de susceptibilidad difieren para el 5% de los aislados que tenían patrones de bandas idénticos.