Diseño del ensayo, cumplimiento y aprobación ética
Este ensayo se diseñó según las directrices de la medicina basada en la evidencia y se informó utilizando los Estándares Consolidados de Informes de Ensayos (CONSORT) -. El diseño del estudio es un ensayo clínico de campo prospectivo, a ciegas, de dos brazos y paralelo para la determinación de la dosis. El estudio cumplió con la directriz de la Comunidad Económica Europea sobre la demostración de la eficacia de los medicamentos veterinarios que contienen sustancias antimicrobianas. Tanto el Comité de Ética para Experimentos con Animales de la Universidad de Helsinki en Finlandia como la Junta Nacional de Experimentos con Animales de Finlandia aprobaron el protocolo del estudio. Los propietarios proporcionaron su consentimiento informado por escrito en el que aceptaron participar con su perro.
Población de estudio, criterios de inclusión y exclusión
Este estudio se llevó a cabo en el Hospital de Enseñanza de Pequeños Animales, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de Helsinki, Finlandia. La población del estudio se reclutó a partir del material de pacientes de un ensayo clínico prospectivo, aleatorizado, doble ciego y controlado con placebo sobre la eficacia de la tilosina oral en el tratamiento de la diarrea recurrente en perros, que se llevó a cabo justo antes de este ensayo actual de determinación de la dosis . Los perros se consideraron elegibles para el ensayo de determinación de la dosis de tilosina oral si respondían a un tratamiento con tilosina a una dosis de 25 mg/kg una vez al día durante siete días en el ensayo mencionado. Los criterios de inclusión fueron que los perros tuvieran al menos seis meses de edad y hubieran sufrido diarrea recurrente que respondiera al tratamiento con tilosina. No podían haber recibido corticosteroides sistémicos, antiinflamatorios no esteroideos o antibióticos distintos de la tilosina en los 90 días anteriores al ensayo de determinación de la dosis de tilosina. Se excluyeron las perras lactantes, así como los perros con evidencia de enfermedad sistémica o relacionada con un órgano que pudiera causar diarrea de forma secundaria.
Los perros se sometieron a un examen inicial antes de la inscripción en el ensayo de eficacia de la tilosina para asegurarse de que cumplían los criterios de selección. En resumen, el examen inicial incluía la historia clínica y la exploración física de los perros, muestras de sangre para un recuento sanguíneo completo y un perfil bioquímico sérico, análisis de orina, análisis fecal para endoparásitos y bacterias enteropatógenas, y gastroduodenoscopia con biopsias de la mucosa del duodeno. El protocolo y los resultados del examen inicial se han publicado previamente.
Medidas de resultado
El objetivo primario del ensayo actual era evaluar si las dosis diarias de 5 mg/kg o 15 mg/kg de tilosina con un intervalo de dosificación de una vez al día durante siete días tendrían efectos similares sobre la consistencia fecal en las recaídas de la diarrea a la de una dosis inicial de 25 mg/kg de tilosina una vez al día durante siete días en estos perros, una dosis que ha demostrado ser eficaz en el control de la TRD canina . Además, para evaluar si la dosis de tilosina de 5 mg/kg era tan eficaz como la de 15 mg/kg. Para evaluar esto, la eliminación de la diarrea sirvió como criterio principal. La eliminación de la diarrea se cumplió al observar que en tres días consecutivos la puntuación fecal de cada una de las heces del perro era y se mantenía en tres o menos. La puntuación media de consistencia fecal asignada durante los tres últimos días del periodo de tratamiento de siete días sirvió como medida de resultado principal. Para determinar la puntuación media de consistencia fecal, los propietarios evaluaron y registraron a lo largo del estudio la consistencia de las heces de cada uno de sus perros según un sistema de puntuación fecal estandarizado establecido previamente por Moxham . Este tipo de sistema de puntuación fecal ha demostrado ser útil para evaluar el éxito del tratamiento en pacientes con diarrea ,,-. En resumen, el sistema de puntuación fecal se basa en una escala de nueve puntos, que consiste en puntuaciones de uno a cinco, con intervalos de medio punto. Para garantizar la uniformidad de la puntuación de la consistencia fecal, comprende tanto una descripción verbal como una imagen visual para cada una de las puntuaciones de la consistencia fecal. Las puntuaciones 1 y 1,5 representaban heces de consistencia dura y seca. Las puntuaciones 2 y 2,5 indicaban heces bien formadas que no dejaban marca al recogerlas. Una puntuación de 3 representaba heces de consistencia ligeramente húmeda, mientras que la puntuación de 3,5 representaba heces de consistencia húmeda, pero que aún tenían alguna forma definida. Las puntuaciones 4 a 5 describían heces de poca consistencia.
Para evaluar si la dosis de tilosina era eficaz, el investigador calculó una puntuación media de consistencia fecal de las puntuaciones asignadas para cada una de las heces del perro durante los últimos tres días del periodo de tratamiento de siete días, basándose en los registros del propietario. Se definió como respondedor aquel que tenía una puntuación media de consistencia fecal de tres o menos; un no respondedor tenía una puntuación de más de tres. Los propietarios desconocían estas definiciones.
Se definieron medidas de resultado secundarias para evaluar la tasa de recurrencia y el tiempo hasta la recurrencia de la diarrea con una dosis de 25 mg/kg de tilosina. La recurrencia de la diarrea se definió cuando las heces del perro tenían una puntuación de consistencia de al menos cuatro en la escala durante al menos dos defecaciones consecutivas. Se definieron otras medidas de resultado secundarias para evaluar la influencia de las tres dosis diferentes de tilosina (5, 15 y 25 mg/kg) en el momento del cese de la diarrea. El día en el que cesó la diarrea se definió como el día del periodo de tratamiento en el que la puntuación fecal de cada una de las heces del perro fue y se mantuvo en tres o menos.
Intervenciones
Al evaluar la elegibilidad de los perros para este ensayo de determinación de la dosis presente, todos los perros tenían diarrea y comenzaron su tratamiento con tilosina a una dosis de 25 mg/kg una vez al día durante siete días. Los propietarios de los perros evaluaron y registraron la consistencia de las heces de cada uno de ellos. El séptimo día del periodo de tratamiento, cada perro fue sometido a un examen físico y se recogieron sus registros de consistencia fecal. El investigador registró el día en que cesó la diarrea del perro y calculó la puntuación media de la consistencia fecal de cada perro durante los tres últimos días del periodo de tratamiento con una dosis de tilosina de 25 mg/kg; los perros definidos como respondedores se consideraron aptos para participar en el ensayo de determinación de la dosis. A continuación, se interrumpió el tratamiento con 25 mg/kg de tilosina para los perros participantes y se realizó un periodo de seguimiento de hasta dos meses para determinar si la diarrea reaparecía. No se permitieron cambios adicionales en el manejo de la alimentación o la medicación del perro. Una vez cumplidos los criterios de reaparición de la diarrea (puntuación fecal ≥ 4 durante al menos dos defecaciones consecutivas) cada perro se sometió a un examen físico, durante el cual el investigador también evaluó y confirmó la consistencia fecal mediante palpación rectal. A continuación, los perros recibieron tilosina (tartrato de tilosina 120 mg y 240 mg en comprimidos, University Pharmacy, Helsinki, Finlandia; equivalente a 100 mg y 200 mg de tilosina) una vez al día durante siete días en dosis de 5 mg/kg o 15 mg/kg.
Durante el periodo de tratamiento de siete días, los propietarios continuaron evaluando las deposiciones de cada uno de sus perros y registraron su consistencia fecal según las directrices. El tercer día, el investigador llamó por teléfono al propietario para asegurarse de que el estado clínico del perro cumplía los criterios del criterio de finalización humanitaria del estudio y si el perro debía ser liberado del estudio y tratado en consecuencia. El punto final humanitario se definió como el punto en el que el estado clínico del perro era malo y sufría una diarrea excesiva. El séptimo día, el perro se sometió a un segundo examen físico, que incluía la palpación rectal y una evaluación de la consistencia fecal del perro. Se recogieron los registros de consistencia fecal y se calculó una puntuación media de consistencia fecal para cada perro basada en los últimos tres días del periodo de tratamiento con las dosis de 5 mg/kg o 15 mg/kg.
Asignación a los grupos de tratamiento
Después de la aparición de la diarrea dentro del periodo de seguimiento de dos meses, los perros recibieron un número de estudio ascendente que denotaba el orden en el que la diarrea reaparecía aleatoriamente. A continuación, el investigador asignó a los perros en una proporción de 1:1 a dos grupos de dosis diferentes – 5 mg/kg o 15 mg/kg – que recibieron tilosina por vía oral una vez al día durante siete días. Todos los perros con números de estudio impares fueron asignados al grupo de dosificación de 5 mg/kg, y los que tenían números de estudio pares al grupo de dosificación de 15 mg/kg.
Ciego
El estudio fue de ciego simple y, por tanto, abierto para el investigador pero ciego para el propietario del perro. El procedimiento de cegamiento se llevó a cabo etiquetando los frascos de comprimidos de tartrato de tilosina de 120 mg como «Tylosin tart. S» y los frascos de comprimidos de tartrato de tilosina de 240 mg como «Tylosin tart. V». Los comprimidos eran visualmente idénticos.
Métodos estadísticos
Se utilizaron estadísticas descriptivas para resumir los datos. La prueba de Shapiro-Wilk sirvió para determinar si los datos se distribuían normalmente; los datos no paramétricos se expresaron como mediana y rango. Para los datos no paramétricos se utilizó la prueba de rangos con signo de Wilcoxon para comparar las puntuaciones medias de consistencia fecal de los últimos tres días del período de tratamiento con la dosis de tilosina de 25 mg/kg con las puntuaciones de las dosis de tilosina de 15 mg/kg y 5 mg/kg. Se utilizó la prueba U de Mann-Whitney para examinar las diferencias entre las puntuaciones medias de consistencia fecal en los grupos de dosis de tilosina de 5 mg/kg y 15 mg/kg. Para evaluar el efecto de cada dosis en el tiempo hasta el cese de la diarrea, se utilizó la prueba de rangos con signo de Wilcoxon y la prueba U de Mann-Whitney. El nivel de significación estadística se fijó en P < 0,05; todos los análisis estadísticos se realizaron con un sistema de software estadístico disponible en el mercado (SPSS 18.0 para Windows).