LETTER
W dążeniu do śledzenia i kontroli transmisji Staphylococcus aureus, izolaty pacjentów są zachowywane do badań epidemiologicznych (1-3). Prowadzący badania często zakładają, że kolonie o tej samej morfologii na oryginalnej płytce hodowlanej reprezentują ten sam klon. Jednakże, literatura potwierdzająca to założenie jest bardzo ograniczona. Wiele badań nie odnosi się do tego, w jaki sposób izolaty są wybierane z hodowli (3-5) i stwierdza, że jedna kolonia jest wybierana jako próbka reprezentatywna (6). Obecnie w badaniu Treating Parents to Reduce NICU Transmission of Staphylococcus aureus (TREAT PARENTS) (nr rejestracyjny NCT02223520) ocenia się zgodność szczepów S. aureus kolonizujących rodziców i ich noworodki (7). Aby przetestować powyższe założenie, z jednej płytki hodowlanej zapisano wiele kolonii S. aureus i przebadano je w celu określenia ich genotypów i profili wrażliwości.
Po uzyskaniu zgody rodziców lub opiekunów na udział w badaniu TREAT PARENTS, pobrano próbki wymazu z nawy, gardła, pachwiny i okolicy okołoodbytniczej w celu wykonania badań przesiewowych na obecność S. aureus. Próbki zostały pobrane za pomocą systemu transportowego Copan Eswab (Copan, Murrieta, CA). Z każdej próbki pobrano po 10 μl na jedną czwartą płytki z selektywnym agarem chromogennym dla S. aureus (SASelect; Bio-Rad, Hercules, CA) i jedną płytkę z 5% agarem z krwią baranią (SBA; Remel, Lenexa, KS) i inkubowano w temperaturze 37°C przez 16 do 24 h. W tym samym czasie po 100 μl z każdej próbki pobrano na bulion sojowy tryptyczny zawierający 6.5% chlorku sodu (Bio-Rad, Hercules, CA) i inkubowano w temperaturze 37°C przez 16 do 24 h. Po inkubacji 10 μl każdego bulionu posiano na podłoże SASelect i 5% SBA, wykonano posiew w celu izolacji i inkubowano w temperaturze 37°C przez 16 do 24 h. Kolonie musiały mieć ten sam kolor, wielkość, konsystencję i całość, aby można je było uznać za identyczne. Dwóch technologów medycznych niezależnie odczytywało płytki i nie było między nimi żadnych niezgodności w określaniu identycznych i różnych morfologii na podstawie opisanych kryteriów. Dla każdej morfologii S. aureus na każdej pozytywnej płytce, pięć oddzielnych kolonii było indywidualnie hodowanych na 5% SBA, a następnie zamrażanych. Izolaty te analizowano metodą elektroforezy w żelu o pulsacyjnym polu elektrycznym (PFGE) oraz testem wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe (AST) z użyciem standardowych środków przeciwdrobnoustrojowych.
PFGE przeprowadzono zgodnie ze standardowymi metodami z użyciem SmaI jako enzymu restrykcyjnego (8). Wzorce trawienia restrykcyjnego analizowano za pomocą oprogramowania Fingerprinting 2 (Bio-Rad). Wyniki PFGE interpretowano stosując zmodyfikowane kryteria Tenovera, a izolaty uznawano za spokrewnione, jeśli ich wzory różniły się trzema lub mniej pasmami (9).
Wrażliwość izolatów określano za pomocą aparatu BD Phoenix 100 (BD Diagnostics Inc., Sparks, MD) z panelami Phoenix PMIC/ID-105 zgodnie z instrukcjami producenta.
Połączenie 14 noworodków i dorosłych uczestników miało pozytywne posiewy S. aureus, które dały 205 izolatów (5 izolatów z 41 obserwowanych morfologii). Spośród badanych izolatów, 99,5% (204 z 205) miało wzór PFGE identyczny z wzorcami innych izolatów o określonej morfologii. Jeden izolat w jednej grupie różnił się o jedno pasmo od pozostałych czterech izolatów, i są one uważane za epidemiologicznie powiązane.
Wykazano, że 95,1% (195 z 205) badanych izolatów miało ten sam profil wrażliwości na wszystkie 16 badanych antybiotyków (dane nie pokazane). Wszystkie izolaty wykazywały zgodność kategorialną (CA; zgodność wyników wrażliwych/pośrednich/opornych) dla wszystkich antybiotyków z wyjątkiem erytromycyny (90% CA). W przypadku, gdy było to możliwe do określenia, zgodność zasadnicza (EA; MIC dokładnie pasują lub mieszczą się w zakresie ±1 2-krotnego rozcieńczenia) wynosiła od 90 do 100%. 95% przedział ufności dla odsetka morfologii z dokładną zgodnością wynosi 0,91 do 1 przy zastosowaniu dokładnego dwumianowego przedziału ufności (10).
Ze względu na wysoką częstość kolonizacji i rolę w zakażeniach związanych z opieką zdrowotną (1, 6, 8, 11), S. aureus pozostanie powszechnie archiwizowanym patogenem w badaniach epidemiologicznych. Brak literatury precyzującej selekcję kolonii S. aureus wydaje się sugerować, że podstawowym założeniem w tych badaniach jest to, że pojedyncza kolonia o tym samym morfotypie jest reprezentatywna dla tego samego szczepu. Wyniki naszych badań wskazują, że założenie to jest właściwe dla podobnych morfologicznie kolonii z jednej hodowli. Interesującym, choć nie w pełni nieoczekiwanym, wynikiem były różne profile wrażliwości dla 5% izolatów, które miały identyczne wzory prążkowania.