Trial design, compliance and ethics approval
Test ten został zaprojektowany zgodnie z wytycznymi medycyny opartej na dowodach i zgłoszony z wykorzystaniem Consolidated Standards of Reporting Trials (CONSORT) -. Projekt badania to prospektywne, prowadzone metodą pojedynczo ślepej próby, dwuramienne, równoległe badanie kliniczne z ustalaniem dawki w terenie. Badanie było zgodne z wytycznymi Europejskiej Wspólnoty Gospodarczej w sprawie wykazania skuteczności weterynaryjnych produktów leczniczych zawierających substancje przeciwdrobnoustrojowe. Zarówno Komitet Etyczny ds. Doświadczeń na Zwierzętach Uniwersytetu w Helsinkach w Finlandii, jak i Krajowa Rada ds. Doświadczeń na Zwierzętach w Finlandii zatwierdziły protokół badania. Właściciele wyrazili pisemną świadomą zgodę na udział w badaniu wraz ze swoim psem.
Populacja badana, kryteria włączenia i wyłączenia
Badanie przeprowadzono w Small Animal Teaching Hospital, Faculty of Veterinary Medicine, University of Helsinki, Finlandia. Badana populacja została wyselekcjonowana z materiału pacjentów kontrolowanego placebo, randomizowanego, podwójnie zaślepionego, prospektywnego badania klinicznego dotyczącego skuteczności doustnej tylozyny w leczeniu nawracających biegunek u psów, które zostało przeprowadzone tuż przed obecnym badaniem dotyczącym ustalania dawki. Psy zostały uznane za kwalifikujące się do badania dotyczącego ustalenia dawki doustnej tylozyny, jeśli odpowiedziały na leczenie tylozyną w dawce 25 mg/kg m.c. raz dziennie przez siedem dni w wyżej wymienionym badaniu. Kryteria włączenia do badania były następujące: psy miały co najmniej sześć miesięcy i cierpiały na nawracającą biegunkę, która reagowała na leczenie tylozyną. Psy nie mogły otrzymywać kortykosteroidów, niesteroidowych leków przeciwzapalnych ani antybiotyków innych niż tylozyna w ciągu 90 dni poprzedzających badanie, w którym ustalano dawkę tylozyny. Wykluczono suki w okresie laktacji oraz psy z oznakami choroby ogólnoustrojowej lub związanej z narządami, które mogłyby wtórnie wywołać biegunkę.
Psy przeszły badanie wstępne przed włączeniem do badania skuteczności tylozyny, aby upewnić się, że spełniają kryteria wyboru. W skrócie, badanie wstępne obejmowało wywiad kliniczny i badanie fizykalne psów, pobranie próbek krwi w celu wykonania pełnej morfologii krwi i profilu biochemicznego surowicy, analizę moczu, analizę kału pod kątem endopasożytów i bakterii enteropatogennych oraz gastroduodenoskopię z biopsją błony śluzowej dwunastnicy. Protokół i wyniki badania wstępnego zostały opublikowane wcześniej.
Pierwszorzędowym celem obecnego badania była ocena, czy codzienne dawki 5 mg/kg lub 15 mg/kg tylozyny w odstępie raz dziennie przez siedem dni będą miały podobny wpływ na konsystencję kału w nawrotach biegunki, jak dawka początkowa 25 mg/kg tylozyny raz dziennie przez siedem dni u tych psów, dawka, która okazała się skuteczna w kontrolowaniu TRD u psów. Ponadto, aby ocenić, czy dawka tylozyny 5 mg/kg była tak samo skuteczna jak dawka 15 mg/kg. Aby to ocenić, eliminacja biegunki służyła jako główne kryterium. Wyeliminowanie biegunki było spełnione, gdy odnotowano, że przez trzy kolejne dni wynik kału dla każdego z odchodów psa wynosił i pozostawał 3 lub mniej. Średni wynik konsystencji kału przypisany podczas ostatnich trzech dni siedmiodniowego okresu leczenia posłużył jako główny miernik wyniku. W celu określenia średniego wyniku konsystencji kału, właściciele oceniali i zapisywali przez cały czas trwania badania konsystencję stolca każdego z ich psów zgodnie ze standardowym systemem punktacji kału ustanowionym wcześniej przez Moxhama . Ten rodzaj systemu punktacji kału okazał się przydatny w ocenie skuteczności leczenia u pacjentów z biegunką. W skrócie, system punktacji kału oparty jest na dziewięciopunktowej skali, składającej się z ocen od jednego do pięciu, z półpunktowymi odstępami. Aby zapewnić jednolitość w punktacji konsystencji kału, obejmuje ona zarówno opis słowny, jak i obraz wizualny dla każdej z ocen konsystencji kału. Punkty 1 i 1,5 oznaczają kał o twardej i suchej konsystencji. Wyniki 2 i 2,5 oznaczają dobrze uformowany kał, który nie pozostawiał śladów po pobraniu. Wynik 3 oznaczał kał o lekko wilgotnej konsystencji, natomiast wynik 3.5 oznaczał kał o wilgotnej konsystencji, ale nadal posiadający pewną określoną formę. Punkty od 4 do 5 opisywały kał o słabej konsystencji.
Aby ocenić, czy dawkowanie tylozyny było skuteczne, badacz obliczył średni wynik konsystencji kału z punktów przypisanych każdemu z odchodów psa w ciągu ostatnich trzech dni siedmiodniowego okresu leczenia na podstawie zapisów właściciela. Respondent został zdefiniowany jako osoba, której średni wynik konsystencji kału wynosił trzy lub mniej; osoba, która nie zareagowała, miała wynik powyżej trzech. Właściciele nie byli świadomi tych definicji.
Drugorzędowe miary wyników określono w celu oceny częstości nawrotów i czasu do nawrotu biegunki przy dawce tylozyny 25 mg/kg. Nawrót biegunki definiowano jako sytuację, w której kał psa uzyskał wynik konsystencji co najmniej 4 w skali podczas co najmniej dwóch kolejnych defekacji. Dalsze drugorzędowe wskaźniki wyników zostały zdefiniowane w celu oceny wpływu trzech różnych dawek tylozyny (5, 15 i 25 mg/kg) na czas ustąpienia biegunki. Dzień, w którym ustąpiła biegunka został zdefiniowany jako dzień okresu leczenia, w którym wynik w kale dla każdego z odchodów psa wynosił i pozostawał na poziomie 3 lub mniej.
Interwencje
Podczas oceny kwalifikowalności psów do niniejszego badania dotyczącego ustalania dawki wszystkie psy miały biegunkę i rozpoczęły leczenie tylozyną w dawce 25 mg/kg raz dziennie przez siedem dni. Właściciele psów oceniali i zapisywali konsystencję kału każdego z nich. W siódmym dniu okresu leczenia każdy pies został poddany badaniu fizykalnemu, a następnie zebrano dane dotyczące konsystencji jego kału. Badacz odnotował dzień, w którym ustąpiła biegunka u psa i obliczył średni wynik konsystencji kału dla każdego psa w ciągu ostatnich trzech dni okresu leczenia przy dawce tylozyny 25 mg/kg; psy, które uzyskały odpowiedź na leczenie, uznano za kwalifikujące się do udziału w badaniu dotyczącym ustalenia dawki. Leczenie tylozyną w dawce 25 mg/kg zostało następnie przerwane u uczestniczących w badaniu psów, a okres obserwacji trwający do dwóch miesięcy posłużył do ustalenia, czy biegunka powróciła. Nie zezwalano na żadne dodatkowe zmiany w sposobie żywienia psów ani w przyjmowanych przez nie lekach. Po spełnieniu kryteriów nawrotu biegunki (wynik badania kału ≥ 4 dla co najmniej dwóch kolejnych defekacji) każdy pies był poddawany badaniu fizykalnemu, podczas którego badacz oceniał i potwierdzał konsystencję kału przez palpację odbytnicy. Następnie psy otrzymywały tylozynę (winian tylozyny 120 mg i 240 mg tabletki, University Pharmacy, Helsinki, Finlandia; odpowiednik 100 mg i 200 mg tylozyny) raz dziennie przez siedem dni w dawce 5 mg/kg lub 15 mg/kg.
Podczas siedmiodniowego okresu leczenia właściciele kontynuowali ocenę każdego stolca psa i rejestrowali konsystencję kału zgodnie z wytycznymi. W trzecim dniu badacz dzwonił do właściciela, aby upewnić się, czy stan kliniczny psa spełnia kryteria humanitarnego punktu końcowego badania i czy pies musi zostać zwolniony z badania i odpowiednio leczony. Humanitarny punkt końcowy definiowano jako moment, w którym stan kliniczny psa był zły i wystąpiła u niego nadmierna biegunka. W siódmym dniu badania pies był poddawany drugiemu badaniu fizykalnemu, w tym badaniu palpacyjnemu odbytnicy i ocenie konsystencji kału. Zebrano zapisy konsystencji kału i obliczono średni wynik konsystencji kału dla każdego psa na podstawie ostatnich trzech dni okresu leczenia dawkami 5 mg/kg lub 15 mg/kg.
Przydzielenie do grup leczenia
Po wystąpieniu biegunki w dwumiesięcznym okresie obserwacji psy otrzymały rosnący numer badania oznaczający kolejność, w jakiej losowo wystąpiła biegunka. Następnie badacz przydzielił psy w stosunku 1:1 do dwóch różnych grup dawkowania – 5 mg/kg lub 15 mg/kg – otrzymujących tylozynę doustnie raz dziennie przez siedem dni. Wszystkie psy z nieparzystymi numerami badania zostały przydzielone do grupy otrzymującej dawkę 5 mg/kg, a te z parzystymi numerami badania do grupy otrzymującej dawkę 15 mg/kg.
Śledzenie
Badanie było zaślepione pojedynczą ślepą próbą, a więc było jawne dla badacza, ale zaślepione dla właściciela psa. Procedura zaślepienia została przeprowadzona poprzez oznaczenie butelek z tabletkami 120 mg winianu tylozyny jako „Tylosin tart. S”, a butelki z tabletkami zawierającymi 240 mg winianu tylozyny jako „Tylosin tart. V”. Tabletki były wizualnie identyczne.
Metody statystyczne
Do podsumowania danych wykorzystano statystyki opisowe. Test Shapiro-Wilka posłużył do określenia, czy dane mają rozkład normalny; dane nieparametryczne wyrażono jako medianę i zakres. Test rang Wilcoxona został zastosowany dla danych nieparametrycznych w celu porównania średnich wyników konsystencji kału z ostatnich trzech dni okresu leczenia przy dawce 25 mg/kg tylozyny z wynikami przy dawkach 15 mg/kg i 5 mg/kg tylozyny. Test U Manna-Whitneya został użyty do zbadania różnic pomiędzy średnimi wynikami konsystencji kału w grupach dawek 5 mg/kg i 15 mg/kg tylozyny. Do oceny wpływu każdej dawki na czas do ustąpienia biegunki zastosowano test rang Wilcoxona oraz test U Manna-Whitneya. Poziom istotności statystycznej ustalono na P < 0,05; wszystkie analizy statystyczne przeprowadzono przy użyciu komercyjnie dostępnego systemu oprogramowania statystycznego (SPSS 18.0 for Windows).