Preparat z wodorotlenkiem potasu (KOH) pozostaje ważnym testem przyłóżkowym do szybkiego i dokładnego diagnozowania powierzchownych infekcji grzybiczych zwanych dermatofitozami. Narzędzie to jest używane od co najmniej 100 lat, z wczesną terminologią odnoszącą się do niego jako potażu; w ostatnim stuleciu, w dużej mierze, jest to technika przekazywana jako umiejętność od mistrza techniki do uczącego się ucznia. Pierwotny twórca preparatu KOH pozostaje tajemnicą.1
Istnieją różne techniki wykonywania preparatu KOH, a porady i wskazówki dotyczące stosowania tego testu są gorącym tematem wśród dermatologów.2 Mimo że publikacje dotyczące podstawowej opieki zdrowotnej i dermatologii podkreślają znaczenie preparatu KOH,3,4 został on niestety uznany za jedno z zapomnianych narzędzi diagnostycznych.5
Na dermatologach spoczywa obowiązek edukowania studentów medycyny i rezydentów przy użyciu prostej i specyficznej metody, aby ta prosta i skuteczna technika, której czułość wynosi od 87% do 91% w zależności od doświadczenia badającego,6 pozostała częścią klinicznego arsenału. Jednym z problemów w nauczaniu dużych grup studentów i klinicystów jest łatwa dostępność lub osiągalność żywych próbek skóry. W niniejszym artykule opisano metodę pobierania i przechowywania próbek skóry, która umożliwi edukatorom szkolenie dużych grup studentów w zakresie wykonywania preparatów KOH bez konieczności wielokrotnego poszukiwania próbek skóry lub pacjentów z powierzchownymi zakażeniami skóry. Szczegółowy opis pedagogiki stosowanej w nauczaniu przygotowywania i interpretacji preparatów KOH dla dużej grupy studentów jest również omówiony.
Pobieranie próbek
Pierwszym krokiem w nauczaniu przygotowywania preparatów KOH dla dużej grupy jest pobranie odpowiedniej liczby zeskrobin skórnych od pacjentów z powierzchowną grzybiczą infekcją skóry (np. grzybica skóry owłosionej głowy, grzybica skóry mieszanej). Powszechną techniką pozyskiwania próbek skóry jest użycie ostrza skalpela nr. 15 (Rycina 1) do zeskrobania łuski ze zmiany na jej łuskowatej granicy po zwilżeniu tego obszaru płatkiem z alkoholem lub wodą z mydłem.7 Wilgoć z płatka z alkoholem pozwala łusce przylegać do ostrza nr. 15, ułatwiając pobranie. Po zebraniu odpowiedniej ilości łuski, umieszcza się ją na szklanym szkiełku mikroskopowym, rozmazując łuskę z ostrza na szkiełku. Proces ten został zmodyfikowany w celu uzyskania większej ilości próbki w następujący sposób: płytki zainfekowane dermatofitami z łuskami są pocierane ostrzem nr 15, a uwolniona łuska spada do szkiełka mikroskopowego. 15, a uwolniona łuska spada do standardowego pojemnika na próbki moczu. Proces ten jest powtarzany wielokrotnie z różnych miejsc, aby uchwycić przemieszczone łuski wraz z dermatofitami. Stwierdziliśmy, że tak długo jak kubki na próbki są szczelnie zamknięte i przechowywane w stosunkowo suchym i chłodnym środowisku (temperatura pokojowa), próbki mogą być używane do konstruowania szkiełek dydaktycznych z KOH przez co najmniej 3 lata. Nie używaliśmy ich dłużej niż 3 lata, ale podejrzewamy, że po tym czasie nadal byłyby żywotne.
Figure 1. Skrobanie przy wiodącym brzegu zmiany ostrzem skalpela nr. 15 po uprzednim oczyszczeniu powierzchni płatkiem z alkoholem. Przygotowanie szkiełek mikroskopowych
Zważywszy na to, że czas nauczania jest często ograniczony, korzystne jest utrwalenie wielu zeskrobin skóry na dużej liczbie szkiełek mikroskopowych przed sesją, co umożliwia studentom proste dodanie KOH do szkiełek w dniu nauczania. Aby przygotować szkiełka przed zajęciami, konieczne jest zgromadzenie następujących materiałów: kubek na próbki skóry, szkiełka szklane, pinceta, mała pipeta, kubek z wodą, rękawiczki ochronne i ołówek. Po założeniu rękawiczek ochronnych, za pomocą szczypiec lub pęsety należy pobrać kilka płatków kamienia z kubka na próbki i umieścić je na środku szklanego szkiełka. Za pomocą pipety do kamienia dodaje się 1 lub 2 krople wody, a następnie szkiełko pozostawia się do wyschnięcia. Szkiełka zaznaczamy ołówkiem stroną „do góry”, aby zapobiec naniesieniu roztworu KOH na niewłaściwą stronę szkiełka. Skala skórna zostaje utrwalona na szkiełku w miarę odparowywania wody i może być przechowywana do czasu, gdy będzie potrzebna do użycia w standardowym pudełku na szkiełka lub folderze.
Wykonanie preparatu KOH
W dniu nauczania pomocne jest zaangażowanie całej grupy uczniów w wykład wprowadzający na temat celu i zastosowania preparatu KOH. Po jego zakończeniu, studenci przechodzą do stacji roboczej z wszystkimi materiałami potrzebnymi do przygotowania preparatu. W tym momencie należy zaopatrzyć się w 10% roztwór KOH, szkiełka nakrywkowe oraz urządzenie grzewcze (np. zapalniczka, palnik Bunsena, zapałki) (opcjonalnie). Należy umieścić 1 lub 2 łuski skóry na szkiełku podstawowym lub pobrać szkiełko z już utrwalonymi łuskami skóry, a następnie dodać 1 kroplę 10% roztworu KOH bezpośrednio do próbki (rysunek 2). Następnie należy nałożyć szkiełko nakrywkowe na kroplę KOH i próbkę skóry, stosując technikę „bok w bok”, która spowoduje, że łuska znajdzie się w cienkiej warstwie w roztworze KOH, a nadmiar roztworu zostanie wypchnięty na obwód (ryc. 3). Duże ilości nadmiaru roztworu KOH należy usunąć za pomocą ręcznika papierowego, bibuły lub chusteczki higienicznej. Źródło ciepła można wykorzystać do delikatnego podgrzania spodniej strony szkiełka (rysunek 4), ale często wystarczy odczekać od 3 do 5 minut, aby roztwór KOH zaczął działać. Ciepło przyspiesza macerację kamienia i ułatwia dostrzeżenie hyfusów wśród keratynocytów. Niektórzy lekarze zalecają stosowanie sulfotlenku dimetylu zamiast ogrzewania,8 ale to rozwiązanie może nie być dostępne we wszystkich ośrodkach podstawowej opieki zdrowotnej.