Schema del ponte incrociato e forza per stato del ponte incrociato in fibre muscolari psoas del coniglio scuoiato

Le costanti di velocità e di associazione (costanti cinetiche) che comprendono uno schema a sette stati del ponte incrociato sono state dedotte dall’analisi sinusoidale in fibre muscolari psoas del coniglio scuoiato chimicamente a 20 gradi C, 200 mM forza ionica, e durante l’attivazione massima di Ca2+ (pCa 4.54-4.82). Le costanti cinetiche sono state poi utilizzate per calcolare la probabilità allo stato stazionario dei ponti incrociati in ogni stato in funzione delle concentrazioni di MgATP, MgADP e fosfato (Pi). Questo calcolo ha mostrato che il 72% dei cross-bridges disponibili erano (fortemente) attaccati durante la nostra attivazione di controllo (5 mM MgATP, 8 mM Pi), che concordava approssimativamente con il rapporto di rigidità (attivo:rigore, 69 +/- 3%); la rigidità attiva è stata misurata durante l’attivazione di controllo, e la rigidità di rigore dopo un’induzione dello stato di rigore. Assumendo che la tensione isometrica sia una combinazione lineare di probabilità di ponti incrociati in ogni stato, e misurando la tensione in funzione delle concentrazioni di MgATP, MgADP e Pi, abbiamo dedotto la forza associata a ogni stato di ponti incrociati. I dati della compressione osmotica delle fibre muscolari da parte del destrano T500 sono stati utilizzati per dedurre la forza associata a uno degli stati dei ponti crociati. I nostri risultati mostrano che la forza è massima nello stato AM*ADP.Pi (A = actina, M = miosina). Poiché lo stato che porta allo stato AM*ADP.Pi è lo stato AM.ADP.Pi debolmente attaccato, confermiamo che lo sviluppo della forza avviene sull’isomerizzazione del Pi (AM.ADP.Pi –> AM*ADP.Pi). I nostri risultati mostrano anche che un cambiamento minimo di forza si verifica con il rilascio di Pi o MgADP, e che la forza diminuisce gradualmente con l’isomerizzazione ADP (AM*ADP –>AM.ADP), l’isomerizzazione ATP (AM+ATP–>AM*ATP), e con il distacco del cross-bridge. La forza dello stato AM concordava bene con la forza misurata dopo l’induzione dello stato di rigore, indicando che lo stato AM è una stretta approssimazione dello stato di rigore. I risultati di rigidità ottenuti come funzioni delle concentrazioni di MgATP, MgADP e Pi erano generalmente coerenti con lo schema a ponte incrociato.

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